Физиологические и биохимические аспекты стимулирования созревания плодов с помощью продуцентов этилена тема диссертации по экономике, полный текст автореферата

Автореферат диссертации по теме "Физиологические и биохимические аспекты стимулирования созревания плодов с помощью продуцентов этилена"

',4 9 $

АКАДЕМИЯ НАУК ТАДЖИКСКОЙ ССР ИНСТИТУТ ФИЗИОЛОГИИ И БИОФИЗИКИ РАСТЕНИЙ

На правах рукописи

КУЛИЕВ АКИФ АЛЕКПЕР оглы

УДК 581. 192 : 577. 158

ФИЗИОЛОГИЧЕСКИЕ И БИОХИМИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ СТИМУЛИРОВАНИЯ СОЗРЕВАНИЯ ПЛОДОВ С ПОМОЩЬЮ ПРОДУЦЕНТОВ ЭТИЛЕНА

(03.00.12 — Физиология растений)

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

Душанбе —

198 8

Работа выполнена на кафедре биофизики и молекулярной биологии Азербайджанского ордена Трудового Красного Знамени государственного университета им. С. М. Кирова и в лаборатории иммунитета растений ,ордеиа Ленина Института биохимии им. А. Н. Баха АН СССР.

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор М. Н. ЗАПРОМЕТОВ,

доктор биологических наук, старший научный сотрудник

Н. П. КОРАБЛЕВА,

доктор биологических наук, профессор И. Р. РАХИМБАЕВ.

Ведущее предприятие: Тимирязевская сельскохозяйственная академия.

Защита состоится «. . . »........ 1989 г. в . . . час.

на заседании специализированного совета по присуждению ученой степени доктора биологических наук (Д.013.080) в Институте физиологии и биофизики АН Таджикской ССР (734063, г. Душанбе, ул. Айни, дом 299/2).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института физиологии и биофизики АН Таджикской ССР.

Автореферат разослан « . . .»........198Э г.

Ученый секретарь специализированного совета, кандидат биологических наук

Р. И. ЧЕРНЕР

• ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Уже долгие года внимание шшгих не-, следователей привлечено к изучению сложной последовательности физиологических и биохимических процессов, происходящих в плодах при их созревании. Успехи последних лет, появление более совершенных методов исследования, позволили с новых позиций подойти к изучению этой проблемы и сделать принципиально вкхные выводи как для познания биохимической природы всего сложного комплекса процессов созревания, так. и для эффективного управления ilv.ii в условиях современного плодоводства.

Исключительно важную роль в решении этой проблемы сыграли наблюдения Нелюбова в начале нашего столетия, свидетельствующие о Физиологической активности этилена в растениях, а также обнаружение американским физиологом Денни способности этого соединения ускорять созревание плодов (Nelubov , 1901; Denny, 1924). Впоследствии в течение длительного времени исследовались различные аспекты феномена, обнаруженного Денни. Результаты обобщены в многочисленных обзорах ( Burg, 1962; 1965; Pratt, 1969, 1975; Abeles , i9?3; Urlich, 1975; Кораблева, 1978; Чкаников, 1979; Biaie , Jang , 1981; Ракитин,1983; Jang , 1986). Однако, до тех пор пока исследования физиологической роли этилена велись с помощью экзогенного газообразного этилена, они не когли привести к значительным успехам в выяснении роли этилена как в теоретическом, так и в практическом плане. Положение коренным образом изменилось после того, как были синтезированы соединения, способные выполнять роль продуцентов или доноров этилена. Речь идет о веществах, которые будучи нанесены на растительную ткань, распадаются в ней с образованием этилена. Первое такое вещество было синтезировало еще в 1946 году (Кабачник, Российская, 1946). Им являлаоь 2-хлорэтилфосфонозая кислота, однако интерео к этому соединению, как к регулятору роста и созревания, возник только в 60-х годах ( Maunurd , 1963; Bache, 1970), когда было установлено, что в растительной ткани оно распадается о выделением этилена. В настоящее время 2-хлорэтилфосфоновая кислота выпускается зарубежными фирмами в виде препаратов под названиями: этрел, эте-фон, амхем 66-329, СЕРА, кампоэая, флордимекс и др.

В 70-е годы в Советском Союзе группой исследователей была завершена работа по синтезу и биологическому испытанию нового

продуцента этилена под названием гидрел (в этой работе участвовал и автор настоящей диссертации, что защищено авторским свидетельством ¿5 592150), а тякке его аналога - дигидрела.

Создание продуцентов этилена открыло новые возможности для регулирования созревания плодов непосредственно на материнском растении, что особенно ва-кно для практического применения в с/х. И дело не только в простоте применения продуцентов этилена. Важнее то, что регуляторы созревании распадаются пролонгирован!« и образующими этилен оказывает на ткани более мягкое воздействие, не создавая свойственного экзогенному этилену стрессового эффекта.

Несмотря на значительные достижения в изучении метаболизма этилена в растениях г.ш еще далеки от четкого представления о механизмах его гормонального действия, о взаимосвязи его с другими фитогормонами, о причинах феномена "универсальности" отмена. Процесс созревания, регулируемый донорами этилена, является с этой точки зрения удобной моделью для изучения роли и места этилена в сложной системе гормональной регуляции и для понимания общебиологических принципов старения растительных тканей.

Цель и задачи исследовании. Целью наших исследовании являлось изучение влияния этиленвыделяющшс препаратов на те стороны процесса созревания плодов, которые могли бы служить объективны»/ критерием при оценке биологического действия таких препаратов. Такие критерии могут носить агробиологический характер. В соответствии с. отим в задачу наших исследований входило изучение влияния этиленпродуцентов на интенсивность и равномерность созревания, величину и качество урожая, размеры предуборочного опа дения плодов, уровень, потерь при их хранении, а также изменение при этом дыхательного газообмена плодов, взаимосвязь между выде лением этилена и дыханием плодов, изменение скорости биосинтезе белка на различных стадиях созревания, активность малик-фермент поведение системы фенолоксидаза-полифенолы, изменение активное! оксидазы индолил-3-уксусной кислоты и пероксидазы, метаболизм фенольных соединений, активность феншплашщ-аммиак-лиаэы.

Научная новизна. В работе впервые сформулированы физиолоп биохимичеокие основы стимулирования созревания плодов с помощь: продуцентов этилена;

- показана ключевая' роль фитогормона этилена в системе го мональной регуляции процессов созревания и старения нп примере сочных плодов;

- впервые определены оптимальные условия применения этрелг. и гидрела для стимуляции созревания плодов яблони, персика, сливы;

- установлено, что предуборочная обработка плодов этрелом и гидрелом совместно с КАНУ (калиевая соль -нафтилуксусной кис-лоти) оказывает положительное действие на величину и качество урокая, уменьшает предуборочное опадение при отсутствии каких-либо отрицательнее воздействий на лежкоепособность плодов;

- изучено образование этилена плодами непосредственно на материнском растении, а также влияние стресса на синтез этилена плодами при отделении их от растения;

-• исследовано образование этилена дисками из кожуры и мякоти яблок, находящихся на различных стадиях созревания, и выявлены оптимальные условия образования этилена тканями яблок;

- исследован биосинтез растворимнх и структурных белков в период созревания яблок;

- исследован биосинтез малик-фермента на разных стадиях созревания и старения плодов под действием этрела и гидрела и установлена важная роль этого фермента в реализации стимулирующего действия этиленпродуцентов на созревание плодов; *

- установлены качественные и количест,венные изменения в системе фенолоксидаза-полифенолы в процессе созревания плодов, обра-' ботанных этиленпродуцентами;

- установлено влияние этрела и гидрела на изменение активности оксидазы индолил-3-уксусной 'кислоты (0ИУК) и пероксидаз'ы;

- предложена схема взаимосвязи различных путей метаболизма, участвующее как в реализации генетической программы созревания, так и в осуществлении гормональной регуляции этого процесса.

Практическая и теоретическая ценнооть работы.- На основании результатов впервые проведенных в нашей стране исследований по изучению действия регулятора роста гидрела на созревание плодов яблони, персика и сливы установлены наиболее оптимальные сроки обработки растений и концентрации препарата, установлено также его влияние на интенсивность и равномерность созревания, велитону и качество урокая. Изучены возможности применения препарата в случае, если плоды предназначены для длительного хранения.

На основании полевых опытов установлено, что применение гидрела дает возможность регулировать сроки созревания, увеличивать размеры и вес плодов и, за счет этого, получать существенную прибавку урокая (до ]0-15;0, улучшать вкусовые качества плодов и :н

товарный вид.

Результаты практических исследований послужили научным обоснованием для рекомендаций на использование гидрела для стимуляции созревания плодов и овощей, принятых и изданных Госагропро-мом Азерб.ССР. В диссертации имеются соответствующие акты и документы.

Разработан новый метод для одновременного определения смеси газов Ог,, 1*2 , СО2, СО и этилена методом газовой хроматографии, который монет найти широкое применение при изучении дыхания растений.

На основании проведенных исследований, а также анализа литературных данных, выдвигается ряд идей, касающихся реализации гормональной активности этилена, в которой особая роль отводится балансу между этиленом и ауксинами. Предложена схема, где сделана попытка представить метаболическую взаимосвязь многочисленных процессов, протекающих при созревании плодов.

■Аппробацня работы. Основные -положения диссертации обсуждены и доложены на Ш Всесоюзном биохимическом съезде (Рига, 1974), на научной сессии, посвященной итогам научно-исследовательских работ ВУЗов (Баку, 1975), на научной сессии по итогем иаучно-иссле-довательских работ АГУ им.С.М,Кирова (Баку, 1977), на научной сессии, посвященной 60-летию Октября (Баку, 1977), на коллоквиумах лаборатории иммунитета растений Института биохимии им.А.Н. Баха АН СССР, (Москва, 1977-1978), на республиканской научно-технической конференции "Пути сохранения сельскохозяйственной продукт®" (Одесса, 1978), на 1У Всесоюзном биохимическом съезде (Ленинград, 1979), на Всесоюзном научном»оовещании "Биохимия защиты урожая от потерь при хранении" (АН СССР, ВАСХНИЛ, Мооква, 1981), на заседании секции "Биохимия и техника хранения картофеля, сахарной свеклы, овощей и плодов" Госкомитета Совета Министров СССР Но науке и технике (Москва, 1985), на Всесоюзном совещании по биологии клетки (Тбилиси, 1987), на совещании "Биохимия хранения картофеля, овощей и плодов" (АН СССР, ВАСХНИЛ, Мооква, 1988). '■" - .

Публикации результатов исследований. Материалы диссертации изложены в 27 статьях.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 244 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, описания методов исследования, впсьшт глав ообствонны:;

исследований и" их обсуждений, общего заключения, выводов, а а п.* же списка цитируемой литературы, включаюцей 425 наименований, <> тог; числе 294 наименования зарубежных авторов. Работа иллюстр1ц« вана 45 рисунками, 18 таблицами и I схемой.

ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Объектом исследований служили плоди яблони (сортов Ренет Симиренко, Ренет Шампанский (бумажный), Шафран Кубинский, Пармвн зимний золотой, Джир Гаджи, Сары Синап, сливы (сорта Венгерка обыкновенная) и персика (сортов Иарынджи и йафарани).

Деревья произрастали в одной из важнейших зон промышленного плодоводства Лзерб.ССР - Куба-Хачкасской зоне.

. Плоды опрыскивали на материнском растении водными растворами '.угрела, гидреЛа и концентрации 0,25-1,0 г/л и КАНУ в концент-ращш 0,02 г/л.

>

ь' ряде случаев плоды обрабатывали регулятором роста после их съема. Для этого плоди погружались на 2-3 минуты в раствори препаратов или инфильтрировались ими путем вакуум-инфильтрации (Белозеоскпй, 1951).

По визуальной оценке и по консистенции плоды делились на недозрелые, зрелые и перезрелые.

Снятые плоди хранились в холодильнике при температуре 3-4°С с относительной влажностью 85-90^.

Физико-химические исследования проводились по нижеследующим методаг,!: . . '

- интенсивность дыхания плодов и выделение шли этилена определялось по разработанной нами методике непосредственно на мате рияеком растении (Карагезов, Кулиев, 1979);

- определение интенсивности дыхания гуюдов и выделения ими этилена после их съема проводилось в вакуум-эксикатора. После 23-часовой экспозиций отобранные пробы анализировались на содер-' жание этилена, С02 и 02 (Карагезов, Кулиев, 1977). В ряде олуча-ев дыхательный газообмен плодов и выделение этилена изучалооь о использованием дисков яблок (Оопав . 21ов1аиег , 1979);

- активность малик-фермента (К.Ф. 1.1,1.40) определяли опек.-трофотометричеоки по восстановлению НДЦФ при 340 нм (Салькова, Звягинцева, 1975; Салькова и др., 1975; ВвЦву , 1966). Активность фермента выражали в ед. изменения оптической ютотнооти в

- а -

минуту из расчета на I г материала ( Е/гр.сыр.в./мин);

- активность фенолоксидазы (К.0.1,14.18.1) (ФО) определяли по Боярющу (1951) в собственно!* кодификации (Салькова и др., 1976) и по Уолкеру ( Walker , 1969). В первых двуу случаях активность выражали изменением оптической плотности в минуту из расчета на I г сырого веса ( Е/гр.сцр.в./мин), а в последнем случае - в ед.акт./г.сир.в./мин (за Ед.акт принимали скорость достижения сырым гомогенатом оптической плотности Е=0,150);

- активность псроксидазы (К.Ф Л. II. 1.7) (ПО) определяли по БоЯркииу (1951) с некоторыми модификациями. Активность выражали в Ед.акт/г сыр.в./мин (за Ед. акт. принимали скорость достижения реакционной смесью оптической плотности Е=0,250);

- в основу определения активности оксидазы нкдолил-З-уксус-ной кислоты (0ИУ11) бил положен метод Гордона и Палега ( Gordon , Paieg , 1962). Активность выражали в мг оклсленноЛ ИУК/мг белка/ час или в мг окнсл. ИУК/г сыр.в./час;

- активность -фенилаланинаммиак-лиазы (ФАЛ)(К.I'.4.3.1.5) определяли по методу Цукера (Zucker , I9G9) и Напрог.'.етоза, Шипп-довой (1972). Принцип метода заключался в определении продукта ферментативной реакции (транс-корично.'1 кислоты) по поглощению при 270 км. Активность выражала в условных единицах (мг белка) час (за усл.ед. принимали изменение оптической плотности на ОД).

В ряде случаев проводили частичную очистку ферментных препаратов ФО, ПО и ОИУК путем гель-фильтрации ( 0-25 и о-50, колонка 1,5x19,5 ом, Vt - 35 мл) (Детерман, 1970), высаливания с по- * мощью ( W4 )2 so4 и.диализа (Кочетов, 1980);

Содержание белка определяли по Лоури ( Lowry et ai. , 1954) или по поглощению при 260 нм и 280 нм с последующим пересчетом по номограмме (Кочетов, 1980).

Электрофоретичеокие исследования молекулярных форм ФО, ПО, ОИУК и малик-фермента проводили методом диск-электрофореза в по-Лиакриламидном геле с использованием системы гелей Ä I, №2, й 6 (Маурер, 1970; Сафонов, Сафонова, 1971). Разделение проводили npi силе тока 4 ма на трубку.

. Для проявления изоферментнш: зон ПО использовали омвоь Н202 о бензидином; ФО - пирокатехин, хлорогеновую кислоту и пирогаллол в смеси о пара-фенилендиамином; для малик-фермента исполь-аовали кумаоои бриллиантовый синий R-250 по методу Хранбака (Chranback , 1967).

Изоформы характеризовались по их относительной электрофор тической подвижности (ОЭП) и окраске (по 5-бальной шкале).

Фенольные соединения определяли по методу, в основу которого был положен принцип фракционного извлечения полифенолов (Хар-борн, 1968; Запрометов, 1971; ГеЙсман, 1970; Болйнец, Маштаков, 1979). Получали 2 фракции - этилацетатную (I) и бутаяольную (П). Хроматографическое разделение фракцни-1 проводили в системе я-бу-танол-муравышовая кислота-вода (95:20:10), а фракцию-П в системе н-бутанол-уксусная кислота-вода (40:12:28). Проявителем обжила диазотированная сульфаниловая кислота (Хайо, Мацек, 1962). Для характеристики отдельных фенольных соединений проводилось окрашивание веществ как общими, так и дифференцирующими реагентами (Вигоров, 1968).

Опыты с радиоактивной меткой проводились с дисками яблок. .■ Об интенсивности биосинтеза белка судили по включению равномерно меченого 14С-лейцина в белок. Радиоактивность белковых фракций измеряли на сцинтилляциьнном счетчике 8ь-30 (Франция).

. Применялись также общепринятые методы. Определение оахаров проводили по Бертрану, аскорбиновой кислоты - по Тильмакоу,. витамина Р (рутин) - по Мурри, общей (титруемой) кислотности - методом титрования 0,1 н N«01! (в пересчете на яблочную кислоту), общее содержание фенольних веществ - по Суэйну и Хиллиоу (в пересчете на пирокатехин), концентрацию водородных ионов (рН) -электрохимическим методом на рН-метре "рН-340", содержание оухих веществ в плодовом соке г рефрактометрически.о помощью рефрактометра ИРФ-22.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Влияние различных Факторов на выделение этилена при распаде зтрела и гидрела и их влияние на образование этилена при моделировании созревания. Для изучения дейотвия этрела и гидрела в растительных тканях важно было выяснить влияние на высвобождение этилена из этих препаратов таких факторов как величина рН среды, температура и осмотическое давление.

В проведенных нами модельных опытах выделение этилена из этрела. было отмечено уже при рН раствора 4,0, а из гидрела при рН 3,5. С увеличением рН до 8 выделение этилена сильно возрастает. Повышение рН среды ведет к увеличению выделения этилена из обоих

препаратов, причем выделение этилена из гидрела оказалось более чувствительным к изменению величины pH.

Такое же влияние оказывает и увеличение температуры на выделение этилена из этрела и гидрела: гидрел менее термостабилен.

В течение многих лет существовало мнение, что понижение температуры оказывает незначительное влияние на образование этилена при распаде этрела ( Leugheft , Franklin , 1972). Результаты наших исследований дали возможность показать, что температура оказывает сильное влияние на распад продуцентов этилена. Так при 5°С выделение этилена из препаратов незначительно и почти одинаково (0,5-0,7 мкл, 100 мл/чао), хотя значение ph среды 6,5 было благоприятно для активного разложения препаратов. Увеличение температуры еще на 5°С приводит к почти шестикратному увеличению количества выделившегося этилена. При комнатной температуре (25°С) резко увеличивается как объем выделяющегося этилена, так и разница в этиленпродуцирующей способности препаратов. Эта особенность температурной зависимости распада препаратов должна учитываться как при обработке плодов на деревьях, так и при их хранении в низкотемпературном режиме.

Литературные данные показывают, что при постановке модельных опытов с плодами в лабораторных условиях состав инкубационной ореды и его осмотическое давление могут оказывать существенное влияние на ход биохимических процессов в плодовой ткани (Frenkei et öl. , 1968; ЫеЪегтап et al. , 1977).

Нами была проведена серия модельных опытов для изучения благоприятной инкубационной среды, а также влияния pH на образование этилена дисками плодов яблони в лабораторных условиях (рисунки I, 2). Было выявлено, что наиболее благоприятной средой инкубации даоков является 0,3-0,4 М раствор маннита, который, кстати, является более предпочтительным, чем часто используемый осмотик сахароза, поскольку последнее может включаться в обменные процессы. Что же касается кислотности среды инкубации, то наиболее благоприятным является интервал значений pH - 5,5-6,5, хотя этот фактор может изменяться для различных объектов исследования в зависимости от собственной кислотности плодовой ткани.

Влияние продуцентов этилена на общий ход созревания плодов. Влияние препаратов на созревание плодов оценивалось путем учета таких показателей зрелости плодов как их размеры, окраска и химический состав.

Исследования показали, что обработка плодов этрелом и гидре-

Рисунок I

Образование этилена дисками мякоти плодов яблок Сары Синап в зависимости от условий инкубации .

1 - 0,4М маннит в О.ОЗД К-фос-

фатном буфере, рН G,0;

2 - 0,4М маннит в К-фосфатном

буТюре (0.0Ш), рН 5,0;

3 - дистиллированная вода;

И Часы 4 - воздух.

Рисунок 2

Образование этилена дисками ткани плодов яблони сорта Сарц Синап э зависимости от рН среда (этилен, выделившийся после 12 часов инкубации).

1,0 рй

лом в концентрации 0,5 г/л и I/O г/л за 10-12 дней до съема урожая увеличивает размеры и вес плодов (таблица I). Так если для контрольного варианта яблок сорта Ренет Шампанский прибавка в веое за 10-12 дней составила 18,9$, то для'плодов, обработанных атрелом и гидрелом, эта величина составила соответственно 27,9 а 30,ф?. Аналогичная картина наблюдалась и на сортах Сары Синап И Пармен золотой. Обработка деревьев одной КАНУ на оказалась на увеличении веоа плодов против контроля, а применение КАНУ а сочетании о этрелом (0,5 г/л), хотя несколько ослабило ее действие, однако по сравнению о- контролем привело к увеличению веоа почти в два раза (20,4£ против 11,42). Эксперименты показали, что концентрация обоих препаратов 0,5 г/л являетоя наиболее оптималь-

• Таблица I

Изменение размеров к веса среднего плода у разных видов и сортов

Зиды и сорта плодов, варианта обработки

До обработки

После обработки

Средние размеры и веса

Средние размеры :: веса

Зысота Ширина

нес

Высота

¿прина

Бес

Привео

в % к исходному

к Рэкет ШампаяекиЕ

Контроль Этрел 0,5 т/л Ьщрел 0,5 т/л 26.4 25,9 25,6 45.0 45.1 46,7 58.2 С с Оо - О 62,0 27.3 26.8 28,0 49.4 50.5 51,4 69.0 72,3 . 81,1 18.9 27 9 30.8

Сары Сикал

Контроль с троя 0,5 т/л стоел I т/л Гаяред 0,о г/л 28,6 27,4 27,6 27,2 ' 29,3 28,5 26,7 29.0 47,3 45.5 45,2 45,8 29.4 29,6 29,3 30,3 33.5 34,0 33.6 35,6 63.5 63,0 63.0 66.6 34,2 38.4 39.0 45,4

Пармек золоте.:

Контроль Этоел 0,5 г/л Зтрэл 1,0 г/л Зтрел+КАНГ (0,510,02) КАНУ 0,02 г/л Гкярвл 0,5 г/л 4<а р ъЬ',о 50,4 51.3 49.4 51.6 62,2 62,8 63,1 63 I 62.7 64,3 97,7 98.4 98.9 100,3 97,С 101,5 51,5 56.3 о <2 (5 55,7 52.0 53.4 ' 64 ,4 67.3 65,2 68,2 64.4 68,8 ' 3X8,8 122,3 104 ,7 120,8 108. С 127,7 11.3 24,2 5,8 20.4 12,0 ' 25,9

Венгерка обыкновенная

Контроль Этрел 0,5 г/л стрел I г/л Гндрал 0,5 г/л 18,ь 16.4 18,8 17,1 15,8 15.5 15 5 15.' 6 26.3 ¿6,4 26,2 . 24,6 18.6 19.5 18.3 18.8 15.4 — гч 1 /, / 17,3 16.5 28,5 29.2 17.3 28,0 8.3 10,6 8.0 13.8

го

I

ной для стимуляции роста плодов, а следовательно и для увеличения урожая. Дело однако не только в прибавке урожая, что само т. себе тлеет большое значение. Не менее важно, что под действием этрела и гндрела достигалось получение плодов однородных по размеру. Однородные по размеру плоды плотнее укладываются в тару, а следовательно меньше повреждаются при перевозке. Здесь же следу--ет отметить, что при этих условиях в каждую единицу упаковки помещается большее число плодов и, следовательно, достигается экономия на таре, транспортных средствах и складской площади. Насколько плоды после обработки были более однородны по весу можно судить по данным, относящимся к яблокам сорта Сары Синап (таблица 2).

Плоды были рассортированы на четыре группы. В каждую группу вошли плоды близкие по весу. Судя по полученным данным 63$ всего урожая яблок, обработанных этрелом, и 70$, обработанных гидрелом, приходилось на плоды с кассой 66-60 г. Среда контрольных же плодов не оказалось ни одной группы, на долю которой пришлось бы более 40$. Сходная картина выявилась при анализе урожая олив. '

Одним из показателей стимуляция созревания и степени врелос-ти плодов является развитие характерной для них окраски. В таблице 3 представлены данные, характеризующие окраску плодов пероика и яблок. Если среди контрольных плодов персика'на долю незрелых (желтых) приходилось 32$, то среди обработанных зтрелом и гидрелом (0,5 г/л) таких плодов было лщнь 3$ и 6$ соответственно. Среди контрольных плодов персиков 15$ имели характерную для зрелых плодов красную окраску, а 53$ имели желто-красную. Среди обработанных же плодов соотношение было следующим: 32$ и 65$ в варианте обработки с этрелом и 35$ и 59$ - с гидрелом. Такие же результаты наблюдалиоь ко времени сбора и у яблок сорта Шафран Кубинский.

Химический состав плодов также является важным критерием ; оценки качества и зрелости плодов. Анализ химического состава • показал, что обработка этрелом и гидрелом не ухудшает их качества, а в варианте со оливами происходит даже заметной увеличение количества Сахаров и сухих веществ с одновременным снижением кислотности. ■

Таким образом проведенные опыты со всей убедительностью показали, что обработка плодов донорами этилена улучшает те Их показатели, которые характеризуют большую степень зрелости плодов.

Таблица 2

Соотношение плодов разного веса в урожае яблок сорта Сары Синап до обработки этрелом и гидрелом и спустя 10 дней после обработки (в %)

Вес 1 от ,плодов кг) - до Контроле (вода) Этрел Гидрел До После До После До После

35 46 56 66 - 43 - 55 - 65 - 80 33,3-1,7 1,2*0,5 31,9*1,5 0 29,4*1,7 0 21,1*0,9 23,0*0,9 22,7-1,2 3,4*0,3 23,1*1,2 2,7*0,3 22,6*1,1 37,0*0,5 22,7*0,9 33,4*1,6 23,5*1,4 26,7*1,9 23,0*1,5 38,8*1,9 22,7*1,4 63,2*2,5 24,0*1,6 70,6*3,1

Таблица 3

Соотношение плодов по окраске контрольных и обработанных этрелом и гидрелом при сборе урожая (в %)

Окраока Контроль (вода) Этрел Гидрел

П е р о и к и:

Желтая 32*1,3 3*0,1 6*0,3

Желто-красная 53*2,2 32*1,2 35*1,3

Красная 15*0,8 65*3,3 59*2,1

Я б л о к к:

Зеленые 10*0,4 4*0,2 3*0,2

Желтые 32*1,3 20*1 Д 8*0,4

Желто-красные 58*2,5 76*2,9 79*3,6

Наиболее уязвимым местом в применении этиленпродуцентов для достижения равномерного созревания плодов является возникновение угрозы более сильного опадения плодов, т.к. с ускорением созревания под действием этилена должно усиливаться и опадение плодов. Именно' поэтому большое внимание нами было уделено изучению действия продуцентов этилена на опадение плодов. В наших экспериментах, так же как и копытах других авторов ( Griggs et ai. , 1971; Edgerton , 1971) наблюдалось усиление опадения пЛодов после обработки этрелом и гидрелом. У яблони сорта Шафран-Кубинский и Пармен золотой, обработанных этрелом в концентрации 0,5 г/л, увеличивалось опадение-плодов по сравнению с контролем соответст-

венно на 25^5 и 30%. Данные по гидрелу в течение трех лет наблюдений показали, что гидрел не вызывал столь сильного опадения плодов и процент падалицы был практически одинаков с контроль-' ними.

Выход из создавшейся ситуации мы видели в сочетании применения продуцентов этилена с препаратами, тормозящими опадение плодов, а именно с КАНУ. Наши опыты показали, что в условиях Азербайджана предуборочное опрыскивание яблонь в сочетании этрел + КАНУ позволяет значительно уменьшить опадение плодов примерно на 15;';-20^.

В связи с тем, что созревание плодов продолжается и после отделения их от ¡.'.атеринского растения, было ваяно рассмотреть последствия предуборочной обработки плодов этиленвыделящими препаратами на их устойчивость при последующем хранении. К тому же в литературе этот вопрос практически не обсуждается.

Результаты экспериментов, представленные в таблице 4, приводят к выводу, что между вариантами опыта нет существенных раз-•личий. Естественная убыль в весе оказалась близкой у обработанных и контрольных плодов. Эта серия опытов позволила придти к важному выводу, что предуборочная обработка плодов этрелом и гидрелом в рекомендуемых концентрациях, обеспечивая более равномерное созревание плодов, не влияет отрицательно на последующее их хранение.

Таблица 4

Размеры потйрь от. ин&екционши болезней при хранении яблок Шафран Кубинский в течение 6 месяцев и Пармен золотой в течение 7 месяцев

Варианты Шафран Кубинский Пармен золотой

в % от в % от в % от в % от маосы контроля иасоы контроля •

Контроль ' 8,64*0,4 100,4 10,36*0,49 100

Этрел 0,5 г/л 7,05*0,35 81,6 9,13*0,43 88,2

Гидрел 0,5 г/л 6,62*0,31 76,7 8,68*0,4 82,9

Этрел+КШ (0,ед)а0г)г/я 8,88*0,42 102,8 10,3*0,5 99,4

КАНУ 0,02 т/я 10,15-0,48 117,5 12,56*0,6 121,3

Выделение этилена плодами на материнском растении и в отрыве от него. Содержание этилена в плодах. Имеющиеся в литературе данные по выделению этилена различными плодами получены в опытах с плодами, изолированными от материнского растения. Между тем выделение этилена плодили снятыми с дерева и плодами плодами находящиеся на материнском растении будет происходить различным образом в силу нового фактора - "стрессового" этилена, который индуцируется при съеме плодов.

С другой стороны, определение этилена, выделяемого плодами, часто не отражает истинных объемов образовавшегося этилена поскольку значительная его часть может оставаться в плодовой ткани, не выделяясь в атмосферу. Эти обстоятельства и были учтены нами при изучении влияния зтплеипродуцентов на выделение этилена плодами .

На рисунке 3 представлены данные по выделению этилена плодами .яблони обработанными этиленпродуцеитамп и ауксином. Выделение этилена контрольными плодами за неделю до их сбора находится ца очень низком уровне. Лишь после этого периода количество выделяющегося этилена начинает увеличиваться. Обработка плодов эт~ релом и гидрелом сразу ке приводит к активации выделения этилена. В последние 4 дня предшествующие съему плодов интенсивность выделения этилена несколько снижается, хотя его продукция остается на довольно высоком уровне (в 3 раза выше, чем в контроле).

Применение КАНУ на 2 дня задерживает активацию выделения этилена, однако при использовании за 4 дня до съема КАНУ резко стимулирует образование этилена. Совместное применение этрела и КАНУ не оказало существенного влияния на интенсивность выделения этилена. Вероятно в этом случае действие синтетического ауксина онимаетоя высокими концентрациями этилена экзогенного происхождения.

Опыты по определению концентрации этилена во внутренних тканях плодов (рис.4) показали, что уровень этилена во внутренних тканях на порядок превышает количество этилена, выделившегося в атмосферу путем свободной диффузии. Вместе с тем изменение содержания этилена в тканях плодов во времени сходно с динамикой выделения этилена.

В свете полученных результатов важно было оравнить динамику выделения этилена плодами на материнском растении и при отделении от него. В этом случае можно было бы выяснить долю стреооо-

Рисунок 3

Выделение этилена плодами яблони Пармен золотой на дереве.

1 - контроль;

2 - этрел 0,5 г/л;

3 - гидрел 0,5 г/л;

4 - этрел+КАНУ ' •

(0,5+0,02) г/л;

5 - КАНУ 0,02 г/л.

Время после обработки (дни}

Рисунок 4

Содержание этилена во внутренних тканях плодов яблони сорта Пармен золотой. I - контроль;

2 - этрел 0,5 г/л;

3 - гидрел 0,5 г/л;

4 - этрел+КАНУ

(0,5+0,02) г/л;

5 - КАНУ 0,02 р/л.

* 5 7 II

Время после обработки ( дни/

вого этилена в общем объеме выделяемого плодами газа.

Как видно из данных, представленных на рисунке 5, во всех случаях уже в первые сутки после отделения плодов от материнского растения наблюдалось увеличение выделения этилена. Величина и характер этой реакции не одинаковы у контрольных плодов и плодов, обработанных этрелом и гядрелом. Реакция плодов на отделение от материнского растения выражается в повышении интенсивности выделения этилена, однако у обработанных плодов это повышение значительнее, чем у контрольных. Учитывая тот факт, что скорость раслада препаратов в ткани плодов не зависит от того находятся ли они на дереве, или отделены от него, значительное увеличение выделения этилена при съеме плодов мо&но объяснить увеличением синтеза эндогенного этилена.

• Развитие процесса созревания контролируется, как известно, не столько метаболизмом этилена, сколько взаимосвязью метаболизма этилена и ауксинов.

С целью внесения некоторой ясности в характер взаимосвязи двух гормонов, теснейшим образом связанных с созреванием плодов, нами были поставлены модельные опыты, где изучалось выделение

Рисунок 5

Изменение выделения этилена при съеме плодов яблони Парыен золотой через 5 дней ? после обработки и при хранении в течение 4-х суток.

I - контроль; I -контроль без съема плодов^ 2 - этрел 0,5 г/л; 2 - этрел без : съема плодов; 3 - гид-рел 0,5 г/л; 3 - гид-рел бе'з съема плодов.

О 5 3 « 7 6 9

Дни после еб/нхбо/п/си

м<

этилена из зрелых и недозрелых яблок, обработанных этиленпро-дуценташ, а также разными ауксинами (природными и синтетическими) (табл. 5, 6). Полученные данные свидетельствуют о том, что как и в случае обработки плодов яблони, контакт этиленпроду-центов о дисками яблок вызывает значительное увеличение объема выделяемого тканью этилена. Появление дополнительных количеств газа в системе диски+этрел может иметь, два объяснения - или рао-пад препаратов в присутствии дисков ускоряется, или под действием препаратов индуцируется синтез эндогенного этилена. Спонтанный распад этрела начинается при величинах рН выше 4,0-4,2. Учитывая, что значения рН'используемого буфера (5,8-6,0) превышали кислотность клеточного сока дисков (рН 4,8-5,8) можно предположить, что избыточное количество этилена, выделяемого системой этрел+диски имеет биогенное происхождение.

Аналогичные результаты были получены в случае инкубации дисков-с гидрелом.

Особый интерёс представляют результаты опыта по влиянию ПУК на выделение этилена. Этот природный ауксин оказался чрезвычайно эффективным стимулятором образования этилена (табл.5). Дальней-' шла опыты показали, однако, что ГОК оказывает различное влияние на процесс индукции биосинтеза этилена в зависимости от возраста дисков (табл.6). Молодое диски выделяют значительно меньше этилена, чь.л старые (почти в 20 раз). Что же касаетоя влияния исследуемых препаратов, то видно, Что ни один из них не стимулирует образования этилена. Таким образом особенности влияния ауксина так же как и этиленпродуцентов, на биосинтез этилена в существенной степени зависят от возраста ткани и ее физиологического состояния.

В отличие от ИУК обработка1 дисков МНУ практически не оказала влияния на образование этилена.

Влияние продуцентов этилена на дыхательный газообмен плодов. Взаимосвязь вид лента этилена е..дыханием плодов. В плане регуляции созревания плодов такие факторы, как интенсивность, дыхательного газообмена и время наступления климактеричеокого дыхания, можно, по-видимому, использовать в качества одного из показателей действия продуцентов этилена. • ' «

Наши исследования показали- (рис.6), что обработка деревьев этреяом (гидрелом), а такяа КАНУ как отдельно, так и совместно, способствует более быстрому наступлению климактерического подъема дишшя плодов, что, как известно, является характерным.приз- -

Та&лтя .5

Количество этилена (вл/шг/3 часа) выявляемое дисками из зрелых яблок в процессе инкубации'с растворами этрела (150 мг/л), тиирела (150 мг/л). ЮТ (I0~3 М) и КАНУ (Ю~5 М)

■ Диски (контр) Диски+ этрел Диски+ гидрел КАНУ+ диски ИУК+ диски Этрел Гидрел

Количество CgH^ через 24 часа 1.0 48,0 40.6 0.95 55,0 40,0 41.7

Количество С^ через 48 часов 1.2 52.0 57.4 1,22 115,0 40.8 95.0

Таблида 6

Количество этилена (нл/мл/З часа) выделяемое дисками из недозрелых

яблок в процессе инкуб (150 мг/л). ИУК (10 алии с растворами этрел (150 мг/л), гидрела М). КАНУ (10~5 М)

Диски Диски+ этрел Диски+ гидрел КАНУ+ диски ИУК+ диски Этрел - Гидрел

Количество CgH^ через 24 часа ■ 0.05 41.6 41.0 0.055 0,и5 41.0 40.0

Количество CgH^ через 48 часов 0,065 44,6 60,0 0,06 0,056 40.8 41,0

наком созревающих плодов и свидетельствует, следовательно, о более раннем наступлении стадии созревания. Наибольшая стимуляция выделения С0£ плодами яблони отмечена в варианте их обработки гидрелом и в меньшей степени этрелом. Что каоается поглощения Од, то варианты обработки этрелом и гидрелом в концентрации 500 мг/л мало различались между собой и превосходили контрольные в 3,5 раза. Стимуляция дыхания плодов начиналась уже в первые оутки после обработки, деревьев и достигала своего максимума на четвертые оутки у сорта Шафран КубинокиЙ и на седьмые - у оорта Пармен золотой, превышая выделение СОд контрольными плодамй в 5-6 раз. Дыхание контрольных плодов продолжало увеличиваться

г "i г н о г 5 1

В рема, после обработки {дни}

Рисунок 6 Дыхание плодов яблони сорта Пармен золотой на л дереве. А - выделение COg, Б - поглощение О2.

Варианты обработки: I - контроль; 2 - этрел (0,5 г/л); 3 - гйдрел (0,5 г/л); 4 - этрел » КАНУ (0,5 +■ 0,002 г/л); 5 - КАНУ (0,02 г/л).

вплоть до съема их с дерева. Исследование дыхательного газообмена плодов персика (рис.7) такне показало, что этрел и гидрел в концентрации 500 мг/л стимулируют дыхание. Однако, в отличие от плодов яблони, стимуляция дыхания происходила не оразу после обработки, а спустя шесть дней. Полученные данные свидетельствуют о том, что реакция плодов на обработку этрелом и гидрелом определяется не только степенью зрелости, но и сортовыми особенностями ...

Таким образом, наиболее важный вывод, вытекающий из полученных данных, сводится к установлению факта значительной стимуляции дыхания у обработанных этиленпродуцентоы плодов яблони и пероика, а также к ускорению наступления климактерического подъема дыхания. •

Полученные наш данные позволяют заключить,, что интенсив-

0 3 о 9 12 0 3 Б 9 12 Время доме обработки (дни}

Рисунок 7 Дыхание плодов пероика сорта Зафаршш во время созревания.

Варианты: I - контроль; 2 - этрел (0,5 г/л); 3 - гидрел (0,5 г/л); 4 - гидрел + КАНУ (0,5(0,02 г/л); 5 - КАПУ (0,02 г/л).

ность дыхания и выделения этилена тесным образом связаны между собой. Кривые изображенные на рис.3,6,7 показывают,• что началу климактерического подъема дыхания всегда предшествует усиление выделения этилена, причем очевидно, что для стимуляции дыханда необходимо накопление его во внутренней атмосфере в физиологических концентрациях. Появление в плодах экзогенного этилена, образовавшегося в результате распада этрела и гидрела вызывало значительное усиление дыхания. Однако, при этом следует отметить, что высокие концентрации этилена тормозят дыхание плодов.

Дыхание плодов .очень четко реагирует на малейшие изменения в выделении этилена. Примером, может служить дыхание и выделение этилена плодами, обработанными сочетанием этрел+КАНУ. Хотя большие количества этилена и снимали характерный для КАНУ эффект ин~ гибирования образования этилена, однако это отразилось и ¡га дыхании плодов, которое отличалось от других опытных вариантов. * Уменьшение выделения этилена и снижение его содержания в тканях плодов вызывало адекватное снижение интенсивности дыхания во всех вариантах.

Биосинтез белка в плодах и влияние на этот процесс продуцентов этилена. Исследование изменения интенсивности биосинтеза белка, а также влияние этрела и гидрела на характер этого изме- • нения на разных стадиях роста и развития плодов имеет большое теоретическое и практическое значение как для понимания молекулярных механизмов процесса созревания и старения-, так и для послеуборочной регуляции жизни плодов.

На рисунке 8 представлены данные по включению радиоактивного лейцина в белок на разных стадиях созревания и старения суб-эпидермальных тканей яблок Антоновка и Ренет Сидаренко.

В плодах сорта Антоновка скорость включения С-лейцияа з белок в первые двое суток после переноса яблок из хранилища в условия комнатной температуры существенно увеличивалась и, . спустя два дня, достигала своего максимального.значения. В это' время интенсивность включения метки по сравнению с исходным по-риодом увеличилась на 40$. В последующие дни скорость включения" метки в белок существенно снизилась и на 4-й день составила лишь 80$ от исходной. За этот же период'сами плоды перезревали. • '

Характер изменения интенсивности биосинтеза белка в плодах ' Генет Симиренко отличался от сорта Антоновка. В первые двое оу-тогс отсорость. включения метки л брлок тютрпотала относительно • .

Рисунок 8 ■ Включение *4С-лейцина в общий белок при созревании и старении плодов яблони.

1 - в плодах сорта Антоновка;

2 - в плодах сорта Ренет Симиренко.

Уоловия опнта: 5 дисков (диаметр 1,0 см, толщина - 2-3 мм) из субэпидермальных тканей плодов инкубировали в радиоактивном буфере, содержащим меченый по углероду лейцин (0,6 мкг/мл) о удельной активностью I мккюри/мл. После инкубации белковые соединения извлекали из дисков с помощью 2% Маон ц осаждали трихлоруксусной кислотой ("с конечной концентрацией 5$). Полученную таким образом фракцию принимали за "общий" белок. Осадок обрабатывали сцинтилляци-онноЙ жидкостью, приготовленной на толуоловой основе .

медленно, а на пятые сутки после переноса яблок из хранилища достигала примерно 21000 расп/мин/г сырого веса, т.е. по сравнению с первоначальным периодом, интенсивность включения метки увели--чилась на 90$. Период старения яблок этого сорта наступал через 9-10 дней и к этому времени интенсивность включения метки падала приблизительно до начального уровня. Во всех случаях максимум включения метки совпадал с развитием признаков, характерных для созревших плодов.

Тамил образом, на основании проведенных опытов, можно придти к выводу, что созревание плодов яблони сопровождается существенным увеличением интенсивности биосинтеза белка. Является, ли наблюдаемая активация биосинтеза белка необходимым процессом, сопровождащим нормальный ход созревания плодов? Чтобы ответить на этот вопрос были проведены опыты по подавлешга биосинтеза белка'специфическим ингибитором биосинтеза белка циклогексимидом на разных стадиях развития плода. Циклогексимид -(10 мкг/мл в 0,35 М растворе Маннита) вводили в целые плоды методом вакуум-инфильтрации. Инфильтрацию проводили сразу после переноса плодов из холодильника в комнату и, спустя 3-5 дней. Введение циклогек-симрда блокировало биосинтез белка во всех стадиях созревания и старения яблок. При инфильтрации этого ингибитора сразу же после переноса ябчок из хранилища в комнатные условия одновременно о подавлением биосинтеза белка наблюдалось подавление развития характерных признаков созревания. Однако, введение ингибитора в плоды после усиления биосинтеза белка практически- не задерживало нормального развития хода созревания, хотя и ингибировало включение *4С-лейцина в белок.' У таких плодов развивалась характерная для зрелого состояния окраска, аромат и размягчение мякоти. Аналогичные данные приводятся Хыомом ( Ни1гае, 1971). Сравнительное изучение действия циклогексимида на разных стадиях созревания яблок позволяет придти к выводу, что усйление биосинтеза белка в яблоках необходимо для нормального созревания и старения плодов.

Последующие эксперименты показали, что созревание плодов яблони сопровождается существенным увеличением биосинтеза как структурных, так и растворимых белков. Биосинтез последних происходит намного быстрее,-чем первых, поскольку именно в растворимой фракции находится большинство ферментных белков. Полученные данные позволяют предположить, что в период созревания яблок происходит активация биосинтеза ферментов, споцн^лчшос для париода

созревания.

Установление того факта, что для инициации созревания необходима предварительная активация биосинтеза белка послужило основанием для исследования механизма стимулирующего влияния этре-ла и гидрела на созревание плодов на уровне биосинтеза белка.

Под действием зтрела и гидрела в концентрации 500 ыг/л интенсивность биосинтеза белка существенно возрастала (рнс.9). . Спустя 5 дней после обработки, скорость включения ^С-лейцина в белок в оштних плодах яблони сорта Ренет Сишренко превышала скорость аналогичного процесса в контроле на 25$. В пдодах, обработанных гидрелом, интенсивность биосинтеза белка также увеличивается по сравнению с контролем.

Таким образом ускорение процесса созрзватш под действием этрела и гидрела сопровождается существенна!.! усилением биосинтеза болка, Оказьшая стимулирующее воздействие на содержание обще-

Рксунэк 9 Влияние зтрела на скорость включения ^С-лейцина в общий белок в плодах яблони Ренет Сишренко. X,- контроль; 2 - этрел 0,5 мг/мл.

Условия опита такие же, как и в случае с рисунком 8 с той ять раячип<?й, что з данном случае инкубационная среда содорта-л!): РПО и р.'стро!» пргтгатот-.

личественные изменения растворимых и структурных белков. Так было установлено, что, спустя пять дней после обработки этрелом, интенсивность биосинтеза растворимой фракции увеличилась от первоначального уровня в 2,4 раза и превышала контрольные значения примерно на &0%. А в плодах, обработанных гидрелом, за этот же промежуток времени интенсивность биосинтеза белка по сравнению с первоначальным периодом усилилась в 2 раза и превышала окорость этого процесса в контрольных плодах на 35%. В то же время было установлено, что этрел и гкдрел не оказывают сколько-нибудь значительного влияния на скорость включения ^С-лейиина в структурные белки.

Эти исследования показали, что этрел и гадрел значительно усиливают биосинтез растворимой фракции, не оказывая практически влияния на биосинтез структурных белков.

Изменение активности и интенсивности биосинтеза малатдегид-рогеназы декарбоксшшругоаей под действием этрела и пшрела.

Малатдегидрогеназа декарбоксидирующая (ВДГ) или малик-фер-мвнт является одним из ключевых ферментов созревания. В связи с этим изучение ее активности и синтеза в процессе созревания и старения плодов имеет вазнгоэ значение. Следует отметить, что влияние синтетических регуляторов - этреяа и гидрела - на активность и синтез малатдегидрогеназы плодов практически не было изучено. .

Проведенные нами исследования показали, что в субэпвдермаль-ных тканях в период созревания ябл'ок (на 5-й день эксперимента) активность ВДГ возрастала на 30$ (рис.10). В последующие сутки (период старения) активность ВДГ значительно падала и на 10-й день составила около пат овины первоначальной. Обработка плодов этрелом и гидрелом ускоряя процесс созревания повышала одновременно и активность фермента. Действие 'этих регуляторов роста достигало своего максимума на. 4-5 сутки эксперимента. Активность MUX через 5 дней посла обработки этрелом увеличивалась в два раза и превосходила активность фермента в контрольных плодах иа 70$. В плодах, обработанных гидрелом, активность ВДГ была на 30$ выше контрольной. В постклимактерический период активность ЩГ п обработанйнх регуляторами роста яблоках падала, однако уровень активности оставался более высотам, чем в контрольных плодах.

Возникает вопрос, связано ли увеличение активности !ЛДГ с биосинтезом ферментного болка de novo или оно является розуль-

Рисунок 10 Влияние зтрела и гщрвла на активность МИГ при созревании и старении плодов яблони. I - контроль; 2 - этрел 0,5 г/л; 3 - гидрел 0,5 г/л.

татом активации каких то латентных форм фермента. Для выяснения этого вопроса нами было проведено разделение меченого растворимого белка при помощи электрофореза в полиакриламидном геле и определено включение С-лейцина в различные полосы белков и, в частности, в полосу ЩГ. На рисунке II представлена электрофоре-грамма белков, из которой следует, что в растворимой фракции присутствуют не менее 22 белков дающих окрашивание с кумасси ярко-голубым. При этом МДГ локализованы в виде широкой зоны в левой чготи электрофореграмм. По интенсивности окраски с кумасси ярко-голубым и ширине полосы МИГ можно отнести к доминирующим белкам растворимой фракции тканей плодов яблони.

Для сопоставления интенсивности биосинтеза ВДГ с биосинтезом иных белков растворимой фракции было исследовано также включение 14С-лейцина и в некоторые другие наиболее интенсивно окрашиваемые белковые полосы: первую, шестую, одиннадцатую и восемнадцатую. Для этого окрашенные белковые полосы геля вырезали, высушивали и растворяли в 0,1 мл 30$ Н^ (2 часа при 50°0). Растворы помещали в сцинтилляционную жидкость на толуоловой основе оо спиртом.

По.тучешше данные показывают, что уоояеш, включения ^С- .

лейцина в отдельные белковые полосы существенно различается II заметно изменяется при созревании. Так радиоактивность первой полосы в начале опыта выше, чем других выбранных для изучения. По мере созревания и старения яблок включение метки в эту полооу снижалось более чем на 20$. Этрел, и особенно гицрел, ускоряли этот процесс. Иначе изменялась радиоактивность полосы 3, в которой сосредоточена МДГ. На пятый день опыта включение *4С-лейцина в белок полосы 3 возросло в контрольных яблоках на 40$, в обработанных этрелом - на 130? и гицрелш - на 96$. Активация включения ^С-лейцина в полосу 3 под влиянием этрела и гвдрела хорсшо согласуется с увеличением активности ВДГ в обработанных этими препаратами плодах. В постклимактерических плодах биосинтез белков полосы 3 ослабевал во всех вариантах опыта. Уровень радиоактивности полосы 6 в климактерических плодах также увеличивается, но в меньшей степени, чем у полосы 3. Этрел и гидрел и в этом

мой фракции*.

ж За растворимые белки принимали фракции, которая извлекаюсь из субэпидермальных тканей пледа раствором, содержащим мета-бисульФит натрия (5.10~3М)карбонат калия (0.1М) и хлористый калий (0,15 М). Пектиновые вещества осаадали уксуснсь кислшд ютнкем (0,01 М). Дальнейшие процедуры проводили точно также, к°.к ^чя Фткщш "общего" белка.

случае активировали включение "^С-лейцина в белок, однако эта активация била менее выраженной. Изменение уровня радиоактивности полосы. 18 в климактерических плодах не превышает 11-26%.

Полученные данные указывают на взаимосвязь между активацией МДГ и повышением уровня включения ^С-лейцина в белок. Этрел и гидрел усиливают активацию МДГ. Учитывая, что названные регуляторы роста стимулируют созревание плодов, можно сделать вывод, что такая стимуляция осуществляется на уровне синтеза белка и специфического для фазы созревания фермента - МДГ.

Влияние этрела и гидрела на метаболизм фенольных соединений в плодах. Изменение скорости созревания плодов с помощью этилен-выделявдих препаратов дает возможность изучения динамики фенольных соединений как в процессе естественного, так и ускоренного розревания.

Изучение поведения суммарных полифенолов в плодах показало, что оба препарата оказывают заметное влияние на их содержание. Было установлено, что обработка плодов яблони этрелом за 10 дней до сбора повышает содержание полифенолов в 2,5 раза, а гидрелом примерно в 2 раза, тогда как в контрольных плодах количество фенольных соединений увеличилось лишь в 1,5 раза.

Наряду с изменением общего количества полифенолов в плодах, нами были также установлены некоторые"-изменения в юс качественном составе, возникающие под влиянием обоих препаратов. В результате исследования двух фракций фенольных соединений (этилацетат-ной - фр. I н бутаяольиой - фр. II) были обнаружены новые феноль-, ные соединения, отсутствующие в контрольных экстрактах. При проявлении диазотированной сульфаниловой кислотой одно из этих соединений было выявлено .в первой фракции ( К* 0,74, зеленое пятно), а другое - во второй фракции ( яг 0,9 оранжево-розовое пятно). . Судя по площади пятен и интенсивности окраски, содержание этих соединений, образовавшихся в результате обработки, увеличивалось в процессе созревания.

Вджно отметить, что динамика накопления фенольных соединений фракций I и П у контрольных и опытных плодов существенно различаются (табл. 7).

■ Как видно из таблицы, за 6 дней (между 3 и 9 днями) под влиянием фенольных соединений этиленпродуцентов содержание фракции I возрастало, причем под влиянием этрела оно практически уд-воилооь, под влиянием же гидрела только в последние три дня про-

Таблица'7

Содержание фенольных соединений фракций I и 1Г при созревании контрольных и обработанных этрелом и гидрелом плодов яблони сорта Иармен золотой (кг/г сухого веса)

Фракция- Дни после обработки

0 3 6 9

Контроль 1,56 1,52 1,55 1,67 .

I Этрел 1,56 1,60 2,41 3,22

Гидрел 1,56 1,55 1,55 . 2,70

Контроль 0,32 0,35 0,51 1,26

П Этрел 0,32 1,00 1,Н 1,30

Гидрел 0,32 0,59 0,80. 1Д4

исходило резкое увеличение содержания•фенольных соединений. Наиболее быстрое накопление фенольных соединений фракции П отмечено в первые 3 дня наблюдений, после чего теш накопления резко замедляется.

Таким образом, проведенные исследования показывают, ч^о в обработанных плодах происходят значительные изменения качественного и количественного состава полифенолов, метаболизм которых за5летно отличается от метаболизма этих соединений' в контрольных плодах.

В свете вышеизложенного возникает закономерный вопрос -какое звено метаболизма фенольных соединений являетоя точкой приложения действия указанных препаратов: усиливается ли биосинтез полифенолов или их катаболизм?

Для выяснения этого исследовали влияние этрела и гидрела на поведение одного из ключевых ферментов биосинтеза фенилпропанои-дов - ь - фенилаланин-аммиак-лиазы (ФАЛ), катализирующего начальные этапы биосинтеза полифенолов. •

Проведенные исследования показали, что содержание полифенолов в различних вариантах опыта взаимосвязано о уровнем активности ФАЛ в плодах (рис.12). Следовательно особенности влияния препаратов на изменение содержания фенольных соединений в плодах опосредованы их влиянием из активность ФАЛ. .'

Другим, по менее взгшпч, Ферментом метаболизма фенольных

О 3 : ъ &

Дни после обработки Рисунок 12 Изменение активности ФАЛ в плодах яблони сорта Пармен золотой, обработанных'этрелом (0,5 г/л) и гидрелом (0,5 г/л). I - контроль; 2 - гидрел; 3 - этрел.

соединений является о-дафеяолоксидаэа (Ф0), управляющая процессами окисления большой группы полифенолов, а следовательно, влияющая иа<уровень их общего содержания в плодах.

Исследования феяолоксидазной активности-в плодах яблони, обработанных этрелом и гидрелом за 9 дней до съема (рис.13 А) показало, что обработка плодов приводит"« резкому падению активности ФО. Подавление активности Ю в плодах опытных вариантов происходит в первые же дни после обработки. В дальнейшем динамика изменения феяолоксидазной активности во всех вариантах одинакова по характеру, с той лишь разницей,.что активность фермента в обработанных плодах всегда остается на более низком уровне по сравнению с контролем. Это может сйиде^ельствовать о том, что действие фермента в опытных плодах протекает на фоне стабильно« иягибярования. Это предположение было проверено путем исследования феяолоксидазной активности в очищенных ферментных препарата: всех вариантов опыта. Очиотка, производимая с помощью гель-фялвтраиии, позволяла удалять из гомогекатов фракцию низкомоле-кулярннх соединений, содерта^уп предполагаемый ингибитор '5ер-мрнтя.

Дни после обработки

'Активность поочищенной (А) и очищенной (Б) 10 полученной нч обработанных этрелом и гпдрелом ¡йодов яблони Наркен.

А: X - контроль; Б: I - отрел 0.5 г/л;

2 - этрел 0,ь г/л; 2 - гидрел 0,5 г/л;

3 - гндреЛ 0,5 г/л. 3 - контроль.

500

Рисунок 14

600 900 600 500 600

Влияние эндогенных фенольных соединений выделениях' из обработанных этрелом (I) и контрольных (2) плодов яблони Пармен на активность ФО в процеоое их осяревания. А,Б,В - соответственно оборы через :}, 0 и Э дней после обработки.

Результаты этих опытов (рис,13 Б) показали, что очистка ферментных препаратов привела к устранению разницы в величинах активности ФО из опытных и контрольных плодов, установленной для неочищенных гоиогенатов (рис.13 А). Следовательно можно считать, что причиной подавления активности ФО п плодах, обработанных этрелом и гидрелом, явилось образование низкомолекулярного ингибитора фенолоксидаэной активности. По-видимому подавление фенолок-сидазной активности в обработанных плодах связано с ускорением созревания, индуцированного этплонпродуцентач'Д!. С другой стороны стимуляция созревания сопровождается существенными изменениями в количественном и качественном составе полифенолов. В связи о этим у нас возникло предположение о возможно:! связи между двумя этими явлениями. Для проверки этого предположена ними бил проведён опыт, где к очищенному ферменту из контрольных плодов добавляли в качестве субстрата суммарную вытяжку фенольннх соединений из обработанных плодов. Результаты отого опита показаны на рпо.14. Из рисунка видно, что фенольные соединения, полученные из обработанных плодов, подавляют активность ФО. Это подавление пропорционально повышению концентрации фенольных соединений из обработанных плодов и составляет в варианте А 2'?%, в Б 30/5 и в В 48%. Анализируя представленные данные, можно сказать, что эффект подавления активности ФО полифенолами из обработанных плодов связан с качественным составом полифенолов, т.е. с появлением новых веществ фенолыюй природы, обнаруженных во фракциях I и П.

Результаты экспериментов позволяют заключить, что обработка * плодов атиленпродувдрувдими препаратами стимулирует накопление в них полифенолов и изменяет качественный состав последних. Установлено, что повышение содержания фенольних соединений в обработанных плодах является следствием активации ФАЛ и онихения активности 40, причем последнее обусловлено подавлением активнооти фенольншя соединениями, синтезируемыми только в обработанных . плодах.

■ Влияние продуцентов этилена на изменение активности око ияадц-иядолюе-З-укоусяой кислоты (ОИУК). Несмотря на множество факторов, влияющих на содержание аукоина в ткани, активности оксидавн Ш, тем не менее, придается особое значение. Именно'о активностью этого фермента, как правило, связывается уровень ювенильной потенции организма и физиологическое оостояние отдельных органов растения (Гуревич, 1979).

Исхода из этого становится понятным, что исследование процесса ферментативного окисления ИУК может дать ценную информацию о содержании этого гормона и его роли в процессах созревания и старения плодов.

Вопрос о природе фермента, окисляющего ИУК, вое еще остается предметом исследований и дискуссий (Ахундов P.M. и др., I98JL; Orison , Filet P.E., 1985). В настоящее время считается, что три фермёнта могут быть причастны к окислению ауксина - оксидаза НТО (ОИУК), пвроксидаэа (ПО) и фенолоксидазп (ФО). Учитывая это, мы исследовали поведение всех трех ферментов в процессе созревания контрольных и обработанных яблок.

На рисунке 15 показана динамика изменения активности ОИУК в процессе созревания контрольных плодов. Видно, что активнооть фермента на протяжении всего периода созревания неуклонно повышается. Эти результаты соответствуют существующим представлениям об угнетении ауксиновой активности по мере наступления процесса созревания.

. Исследование активности ОИУК в плодах, обработанных этр'елем и гидрелом, (рис,15) показало, что, наряду со стимуляцией созревания, происходит и снижение активности ОИУК, К концу созревания отмечен довольно резкий подъем активности фермента, хотя она и остается на более низком уровне, чем в контрольных плодах. Боли следовать обратно пропорциональной зависимости существующей между активностью ОИУК и содержанием в ткани ее субстрата - свободного ауксина, то следует, считать, что стимуляция созревания плодов происходит на фоне более высоких концентраций ИУК, чем это имеет место в контрольных плодах.

По широко распространенному мнению другим ферментом, способным окислять ИУК, является пероксидаза. На рисунке 16 показана динамика изменения пероксидазной активности.в обработанных плодах яблони. Как видно из рисунка оба препарата, наряду о ускорением созревания плодов, индуцируют также и повышение активности, пероксидазы. К концу периода наблюдений происходит выравнивание активностей фермента во всех вариантах опыта.

Представленные данные показывают, что в обработанных этилён-продуцентами плодах происходит увеличение пероксидазной активности, активнооть же ОИУК уменьшается. Это особенно наглядно наблюдается в первые шесть дней после обработки- (рис.16, 17).

Что же касается ФО, которая также рассматривается, как возможный участник окисления ИУК, то полученные нами данные (рис,17)

0-369 дни после обработки

Рис.1а

0 3 6 9 дни после обработки

Рис.16

0 3 Б 9 дни после обработки

Рис.17

Влияние этрела и гидрела на изменение активности ОИУК (А), пероксидазы (Б) и фенолоксидазн (В) в плодах яблони Паркен золотой в процессе ях созревания

I - контроль ' 2 - этрел (0,5 г/л) 3 - гадрел (0,5 г/л)

свидетельствуют о сшжешш активности фермента в опытных плодах на протяжении всего периода наблюдении. Примечательно, что характер поведения фермента обработанных плодов аналогичен поведению'

опте.

Било исследовано также влияние этиленпродуцентов на распределение активности трех изучаемых оерментов по клеточным фракциям и состав их молекулярных форм. Анализировалась цитопдазмати-ческая фракция (содержащая растворимые белга!) и связанная фрак-щи (представленная комплексами белков с органоидами клеток). Для получпшш фракции связанных белков тканевая мезга, оставшаяся после экстракции ¡штоилазматической фракции, обрабатывалась детергентом трптоном-ШОО (конечная концентрация 1$) с целью освобождения белков.из связанных форм. Обе фракции очищались от аизкоколекулярннх примесей ¡1 стабилизаторов путем гель-фильтрации через СеТ:адекс' Г-25.

г-езультаты определения цнтоилязмзтаческой и, связанной фрак-:Ю, Н и ОЛУК у .-юнтролына и обработанных этиленпродуцента-г.-.и плодов ;:родс?лвленн в таблице 8. Как видно из данных таблицы

Таблица 8

. Изменение алтлпностп свободных (А) и связанных (Б) форм фенолекоидазн (Ю), окендазы шгдолплуксусяой ■ кислоты (0!!УК) и иерокопдаэи (110) яблок Ренет Спмиренко' иод, действием отрела' (1'<0 пг/л) ¡1 гадрела (150 кг/л)• '

Фран- Варианты ■Ю ОИУК по

ции 1 см.акт , Уд.акт. Гол.акт. Уд.акт. Гом.акг. акт.

I 2 • I 2 ' 3 4

Контроль 0,41 Г ,78 0,40 г, 74 ■ 0,34 1,48

А 'Зтрел 0,28 1,12 0,29 .0,4? 1,88

Гидрел 0,32 1,33 0,34 1,42 0,41 1,71

Контроль 0,18 3,27 0,20 3,63 0,78 14,18

Б Зтрел 0,08 1,29 0,09 1,45 0,70 11,3

Гидрел О.П 1 ,83 0,13 2, ГС 0,74 12,33

1 ед.акт.х2~Гх.кин""*; й вд.окт.^Г1 х ;

3 - од.акт.:<«'Ч чао""''';

г т

4 ftw.-iKT.xC *х час +.

в гомогенатах обоих фракций, получению: из контрольных плодов, проявляются все три вида активности. Б цитоплазматической фракции наибольшей активностью обладал» ГЮ и 0ИУ1(, а наименьшей - ПО. В связанно!! фракции, напротив, ПО проявляла салу¡6 высокую активность. Расчотн удельных активностей показали, что для всех трех ферментов удельная активность значительно вше п связанной фракции. При этом уделыше активности Ю и ОЛУК и цитоплаэматпчсской фракции в 2 раза ¡иске, чем в связанной. В то же время удельная активность ПО в связанной фракции в 10 раз выпе, чем в цитоплазме, Это обстоятельство, на наш взгляд, очень важно, так как указывает на то, что -Цфменты, с которыми с шт запада окисление ПУК, распределены по фракциям по разному.

Из таблицы 8 видно, что обработка плодов этнленпродуцентами вызывает снижение активности как свободных, так и связанных форм ФО и ОИУК, в то время как активность растворимой формы ПО повышается.

Таким образом этрел и гидрел оказывают существенное влияние на изменение активности всех трех ферментов.

Результаты олектрофоретического разделения молекулярных форм исследуемых ферментов представлены на рисунке 18. Рассмотрим полученные результаты по фракциям.

ции

« «I

„ ч

II

5-3

НО

А »«•■

ФО

ФШ

4

>•4« I

Рисунок 18

Электрофореграммы изоферментных зон свободных (Л) и структурно-связанных (Б) форл фенолоксида-эы (ФО), пероксидазы (ПО) и оксидазы ИУК (ОИУК).

« «>

Цитоплазматическая фракция. В этой фракции выявлено 5 изо-форм ПО, 4 изоформн ФО и 3 изоформы ОИУК, причем активности 50, ПО и ОИУК били локализованы в одних и тех же зонах. В то же время в составе ПО были обнаружены 2 фракции, а в составе 40 одна фракция, обладающая только пероксидазной и фенолоксидазной актин ностяш, соответственно.

Связанная фракция. В отличие от цитоплазматической, в этой фракции выявлено 5 молекулярных форм ОИУК, 4 изо'ормы <10 и 4 изо формы ПО. В спектре €0 имеется фракция, которая не обладает пероксидазной активностью, но способна окислять ауксин. Эта же изо-форма присутствует и в цитоплазматической фракции, однако в этом случае она обладает исключительно фенолоксидазной активностью.

Опыты по исследованию влияния этрела и гидрела на изменение состава молекулярных форм ПО, <50 и ОИУК обоих фракций не выявили каких-либо значительных изменений. Некоторые изменения, наблюдаемые только в цитоплазматической фракции, касались уровня активности отдельных фракций.

Результаты экспериментов показали, что обработка плодов эт-релом и гидрелом оказывает существенное влияние на изменение активности тех ферментных систем, которые способны участвовать в процессе окисления ИУК, а следовательно возможно и в регуляции уровня ауксина в тканях. Однако исследованные-ферменты не .одинаково реагируют на обработку растений этиленпродуцентами - активность ПО повышается, а активность ФО и ОИУК снижается. Аналогичное сходство в поведении ФО и ОИУК и их отличие от ответной реакции ПО наблюдается в отношении их распределения по клеточным фракциям, а также в активности некоторых молекулярных форм ферментов.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Результаты нашего исследования различных аспектов процесоа созревания и старения плодов, а также анализ литературных данных, касащихся этой проблемы, позволили предложить схему взаимосвязи различных путей метаболизма, участвующих в. реализации генетической программы созревания, существенным элементом которой является гормональная регуляция этого процесса (схема).

Рассматривая полученные данные в их взаимосвязи следует принять, что инициируицим толчком к ускорению созревания плодов

зтиле* 4W

ГРЯСПКД ХЛОРО-

ÎlHJUR, ИЗМЕНЕ ИЕ ОКРАСКИ

цвтиьщия неа-ДвЛКЭИ H l(R-TttHicTtpa^w

о

СХЕМА ВЗАИМОСВЯЗИ РАЗЛИЧНЫХ ШТЕЙ МЕТАБОЛИША ПРИ СОЗРЕВАНИИ ПЛОДОВ

является увеличение содержания эндогенного этилена.

Практически все процессы роста, развития и созревания растений находятся под гормональным контролем. Соотношение уровня фи-тогорконов влияет но интенсивность п направленность основных метаболических процессов: дыхания, энергообмена, ферментативной активности, синтеза и распада нуклеиновых кислот и белков. Поэтому перестройки в работе гормонально:! системы могут представлять собой одно из-ключевых начальных звеньев в спектре ответных реакций. Существенная роль в перестройке баланса фитогормонов принадлежит системе ауксины-этилен.

выводи

I*. Исследовано действие продуцентов этилена группы галозтан-фосфоновых кислот: 2-хлорэтилфосфоновой кислоты - этрел и бис -кислой соли 2-хлорэтилфосфоновой кислоты - гидрзл, на физиологические и биохимические процессы в плодах (яблоки, сливы и персики). Установлено, что продуценты этилена ускоряют созревание, обладают эффектом выровненности по степени зрелости и оказывают существенное влияние на интенсивность биохимических процессов непосредственно связанных с созреванием.

2. Показано, что этрел и гидрел при используемой нами постановке полевых опытов эффективно разлагаются в раотительных тканях о выделением этилена. Установлено, что по биологическому действии гидрел, как регулятор созревания плодов, не только не уступает втрелу, но даже несколько лревосходит его'. Высокая чувствительность реакции распада изученных этиленпродуцентов к температуре позволяет регулировать течение этого процесса в плодах. Распад препаратов при низкой температуре (5°С) резко замедляется - примерно в 100 раз по сравнению о выделением этилена при 25°С. Эта оообеннооть очень важна для торможения распада препаратов в плодах при их хранении.

3. Этрел и гидрел оказывают отимулируадее влияние на ход оозревания всех изучавшихся плодов. Стимуляция: созревания сопровождается увеличением содержания этилена, значительным улучшением органолептичеоких показателей плодов (окраока, вцуо, коноио-тенция), повышение их оахаро-киолотного коэффициента. Обработанные плоды после их съема были однородными по степени зрелости и более крупными по размеру и весу.

4. Установлено, что эффективным является однократное опрыскивание деревьев водными растворами препаратов в концентрации (500 мг/л) в объеме 0-10 литров за 10-12 дней до аъема плодов. Полученные результаты показали, что предуборочная обработка плодов этрелоы и гидрелом в рекомендуемых концентрациях, обеспечивая более быстрое созревание плодов, не оказывает отрицательного влияния на последующее их хранение. Для предотвращения преждевременного опадения плодов рекомендуется комбинированное применение препаратов совместно с КАНУ (20 мг/л).

5. Установлено, что обработанные этрелом и гидрелом плоди проходят климактерическую фазу дыхания раньше, чем контрольные. Стимуляция дыхания проявляется как в интенсивности поглощения 02 так и в выделении СОз* Усиление выделения СО.; обработанными плодами, очевидно, связано с усилением активности и биосинтеза малик-фермента, катализирующего декарбоксилироаание основного дыхательного субстрата - яблочной кислоты. Изменения ь дыхательном газообмене сопровождались значительными изменениями в интенсивности выделения этилена, увеличение которой коррелировало с изменением интенсивности дыхания.

6. Методом радиоактивной метки показано, что ранний период созревания плодов совпадает по времени с активацией биосинтеза белка. Блокирование этого процесса подавляет одновременно и развитие процесса созревания. Перезревшие плоды характеризуются резким снижением скорости биосинтеза белка.

7. Обработка плодов приводит к существенным изменениям в количественном и качественном составе фенольных соединений и активности некоторых ферментов их метаболизма. Увеличение содерка-ния фенольных веществ в обработанных плодах обусловлено активацией ключевого фермента биосинтеза фенилпропаноидов - фенил-

ал анинаммиак-лиазы (ФАЛ) и значительным подавлением активности фенолоксидазы (50).

8,Снижение фенолоксидазной активности связано с одной стороны о образованием в опытных плодах ингибиторов фенолоксидазы, а о Другой - изменением физико-химических свойств самого фермента. Есть-основания о читать, что подавление активности фенолоксидазы в обработанных плодах осуществляется фенольными соединениями, отсутствующими в контрольных плодах и образующимися только под воздействием этиленпродуцентов.

9. Изучение в обработанных плодах активности трех фермен-

тов, причастных к окислению ИУК - окоидазы ИУК (ОИУК), перокси-дазы (ПО) и фенолоксидазы ($0) - показало, что этиленпродуценты, вызывая активацию ПО, в то же время существенно подавляют активность ФО и ОИУК. Изучение активности этих ферментов, изменения состава их молекулярных форм, а также особенностей их распределения по клеточным фракциям выявило существенное отличие поведения ПО. от ОИУК и ФО, что указывает на проблемность вопрооа о природе фермента, окисляпцего ИУК in vivo .

Основные результаты диссертации опубликованы в следунвдх научных статьях.

1. Кулиев A.A., Гасанов Т.Г., Насибов A.A. Изменение биохимических показателей в плодах при хранении. - Рефераты научных сообщений Ш Всесоюзного биохимического съезда. Рига, 1974, т.1, о.230.

2. Салькова Е.Г., Кулиев A.A., Ахундов P.M. Спектрофото-метрическое изучение о-дифенолоксидазы яблок. - ДАН АзССР. Баку, 1976, т.ХШ. Ш 3, с.33-36. ■ .

3. Кулиев A.A. и др. Бис-киолая гидразиииевая соль 2-хлор-, зтилфосфоновой кислоты в качестве регулятора роста растений. -

Авторское свидетельство № 592150, М, 1976,

4. Ахундов P.M., Кулиев A.A., Салькова Е.Г. Влияние -этефо-на на активность о-дифенолоксидазы некоторых плодов. - Ученые записки АТУ, Баку, 1977, ffi I, с.33-37.

б. Салькова Е.Г., Звягинцева Ю.В., Кулиев A.A., Ахундов.P.M. Влияние этрела На'биохимические процессы при созревании плодов.-Прикладная биохимия и микробиология. 1977, т.ХШ, № I', И., о. 97102.

6. Мамедов З.М., Салькова Е.Г., Кулиев.А.А. Влияние этрела на включение лейцина С^ в белок в ткани яблок .при созревании. - Прикладная биохимия и микробиология. 1978, т.Х1У, J& I, М.\ о.140-143. ' . • _

7. Карагезов Т.Г., Кулиев A.A. Изменение дыхательного метаболизма и выделение этилена плодами яблони, обработанными регуляторами созревания, в процеосе хранения. - Респ.научно-техническая конференция -"Пути сохранения а/х продукции", Одесса, 1978, с.42-43.

8. Карагезов Т.Г., Кулиев A.A. Метод определения дкт.ателг,-ного газообмена алодоп на-дерене, - Учсннп записки ЛГУ, Ь'япу,

1979, Ii I, с.43-46.

9. Карагезов Т.Г., Кулиев Л.Л., Арустамова Л.Г. Одновременное определение смеси низкокипящих газов 02, н2 , СО^, СО и этилена методом газовой хроматографии. - ДАН АзССР, Баку, 1979, сер. орг.химии, т.ХХХУ, 'SI, с.57-60.

10. Ахундов P.M., Кулиев A.A., Мартынова Г.Ю., Салькова Е.Г. Изменения, происходящие в системе полифенолоксидаза-полифенолы

в процессе созревания плодов, обработанных этрелом. - Физиология раотений, 1979, М., Й I, с.75-80.

11. Кулиев A.A., Абдуллаева Б.Р. Влллние этрела и гидрела на активность и некоторые свойства малик-фермента плодов яблони. - Изв. АН АзССР, Баку, 1979, ib 2, с.49-53.

12. Мамедов З.М., Салькова Е.Г,, Кулиев A.A. Влияние синтетических регуляторов роста на активность и биосинтез малатдегид-рогеназы декарбоксилирующей плодов яблони. - ДАН СССР, М., 1979, т.249, №6, о. 1508-1512.

13. Ахундов P.M., Кулиев A.A., Салькова Е.Г. Влияние этрела на активность о-дифенолоксидазы в плодах персика и яблони и их побурение. - Прикладная биохимия и микробиология. М., 1980, т. ХУ1, вып.З, с.472-476.

14. Ахундов P.M., Ахундова Р.И., Студенцова Г.Ю., Кулиев A.A. Исследование ферментов, участвующих в окислении индолил-3-уксус-ной кислоты в плодах яблони. - Сб.рефератов "Физиологические аспекты жизни растений". Целевой семинар агрономич.фак-та Пражского Университета, Прага, 1981, о.179-185.

15. Кулиев A.A., Карагезов Т.Г. Изменение выделения этилена, как стресоовая реакция плодов на отделение от материнского раотекля. - Сб. науч.трудов "Резистентность растительных организмов к действию физических и химических факторов", Баку, 1981, с.56-62.

16. Кулиев A.A., Карагезов Т.Г. Влияние альфа-НУК на синтез этилена плодами яблок. - Сб. науч.трудов "К изучению резистентности раотений при экстремальных воздействиях среды". Баку, 1982, 0.75-85.

17. Кулиев A.A. Влияете регуляторов роота этрела и гидрела на некоторые показатели зрелости плодов. - Сельскохозяйственная биология, М., 1982, т.ХУП, №4, с.474-477.

18. Кулиев A.A., Цоглауэр К. Выделение этилена тканями яб~ .гот различной стппени зрелости. - Ипиг-ладнач биохимия и микро-

биология, М., 1982, т.ХУШ, вып.2, с. 165-170.

19. Kuliev A.A., Mamedov Z.U. Protein synthe3ia in paren-chymal tissue of epple fruits. - Acta Phyaiologiae Plantarum, 1982, v. 4, No 1-2, p. 399.

20. Кулиев A.A. Влияние этиленпродуцентов этрела и гидрела на некоторые показатели зрелости плодов. - Материалы конференции, посвященной итогам научно-исследовательских работ.¡Ш и ВУЗов ЛзССР за 1981 г. по проблеме физиология и биохимия растений", Баку, 1982, с.42.

21. Zoglauer К., Kuliev A.A., Göring Н. Zur Athylenbildung reifender und ledernder Apfel. - Colloquai Pflanzen Physiologie der Humboldt-Universität zu Berlin, 1982, No 6, p. 67-77.

22. Кулиев A.A., Студенцова Г.Ю., Ахундов P.M. Исоледованиь изменения баланса эндогенных фитогормонов в условиях индуцированного этрелом и'ауксином накопления этилена в плодовой ткани. - Труды У Всесоюзной межуниверситетской конференции "Биология клетки", посвященной 70-летию Великого Октября. Тбилиси, 1987, чД, с.332-334.

23. Кулиев A.A. Исследование изменения баланса фитогормоноь в процессе созревания плодов. .- В сб. "Генетико-физиологические исследования действия физических и химических факторов на организм". Баку, 1988, с.87-92.

24. Кулиев A.A. Рекомендации гго применению регулятора роо-та гадрела в сельском хозяйстве (на русском и азербайджанском языках). - Изд-во Главного управления науки и пропаганды Госаг-ропрома АзССР. Баку, 1988, с.1-7.

25. Кулиев A.A., Студенцова Г.Ю. Поглощение и распад этиленпродуцентов в клетках и тканях растений. - В сб. "Повышение устойчивости растений*; Изд. ЛГУ, Баку, 1988, с.85-92.

26. Кулиев A.A., Ахундоз P.M. Сравнительное изучение действия этрела и ауксинов на выделение этилена" дисками яблок (в печати). - Материалы конференции "Биохимия хранения картофеля, овощей и плодов", М., 1988.

27. Кулиев A.A., Буланцева Е. Влияние различных факторов на выделение этилена из этиленпродуцентов в плодах яблони (в печати). - Прикладная биохимия и микробиология. М.